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    aobious-E0269h產(chǎn)品介紹

    發(fā)布時(shí)間: 2022-09-05  點(diǎn)擊次數(shù): 883次

    aobious-E0269h產(chǎn)品介紹 

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    Aobious  ELISA Kit FOR 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1

    貓?zhí)枺?/span> E0269h

    范圍:0.156-10 ng/mL

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    摩爾濃度計(jì)算車®

    如何訂購

    $685.00

    96 685.00美元

     

    數(shù)量:

    1.00

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    更多信息

    有可能的使用

    該免疫測(cè)定試劑盒可用于體外定量測(cè)定人 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1、血清、血漿、尿液、組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中的濃度。

    測(cè)試原理

    該試劑盒中提供的微量滴定板已預(yù)涂有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1 特異性抗體。然后將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品添加到適當(dāng)?shù)奈⒘康味ò蹇字?,并在每個(gè)微孔板中添加對(duì) 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 特異的偶聯(lián)多克隆抗體制劑和與辣根過氧化物酶 (HRP) 偶聯(lián)的抗蛋白并孵化。然后將 TMB 底物溶液添加到每個(gè)孔中。只有那些含有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1、偶聯(lián)抗體和酶偶聯(lián)抗蛋白的孔才會(huì)出現(xiàn)顏色變化。通過添加硫酸溶液終止酶-底物反應(yīng),并在 450 nm ± 2 nm 波長(zhǎng)下用分光光度計(jì)測(cè)量顏色變化。然后通過將樣品的 OD 與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較來確定樣品中的濃度。

    材料和組件

    試劑                                                                              數(shù)量

    測(cè)定板 1

    標(biāo)準(zhǔn) 2

    樣品稀釋液 1 × 20ml

    測(cè)定稀釋劑 A 1 × 10ml

    測(cè)定稀釋劑 B 1 × 10ml

    檢測(cè)試劑A 1×120μl

    檢測(cè)試劑 B 1 × 120μl

    洗滌緩沖液(25 x 濃縮液)1 × 30ml

    底物 1 × 10ml

    終止液 1 × 10ml

    用于 96 孔的封板劑 5

    說明 1

    所需的其他用品

    酶標(biāo)儀

    移液器和移液器吸頭

    EP

    去離子水或蒸餾水

    試劑盒的儲(chǔ)存

    檢測(cè)板、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)試劑 A 和檢測(cè)試劑 B 收到后應(yīng)保存在 -20。收到試劑盒后,底物應(yīng)始終保存在 4。其他試劑按照小瓶上的標(biāo)簽保存。但要長(zhǎng)期存放,請(qǐng)將整個(gè)試劑盒保持在-20。未使用的條帶應(yīng)保存在密封袋中,并提供干燥劑,以盡量減少暴露在潮濕空氣中。試劑盒可在試劑盒的有效期內(nèi)使用(自生產(chǎn)之日起六個(gè)月)。只要按照上述規(guī)定進(jìn)行儲(chǔ)存,打開的檢測(cè)試劑盒將保持穩(wěn)定直到所示的失效日期。

    樣品收集和儲(chǔ)存

    血清 - 使用血清分離管 (SST) 并讓樣品凝結(jié) 30 分鐘,然后以大約 1000 × g 的速度離心 15 分鐘。立即取出血清并進(jìn)行檢測(cè)或分裝樣品并在-20-80保存。

    血漿 - 使用 EDTA 或肝素作為抗凝劑收集血漿。收集樣品 30 分鐘內(nèi),在 2 - 8 下以 1000 × g 離心 15 分鐘。將樣品儲(chǔ)存在-20-80。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

    尿液 - 無菌收集當(dāng)天的第一次尿液(中游),直接排入無菌容器中。離心除去顆粒物,立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在≤-20。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

    組織勻漿-組織勻漿 的制備將因組織類型而異。對(duì)于該測(cè)定,組織用 1X PBS 沖洗以去除多余的血液,在 20 mL 1X PBS 中勻漿,并在 ≤ -20 下儲(chǔ)存過夜。 進(jìn)行兩次凍融循環(huán)以破壞細(xì)胞膜后,將勻漿離心 5分鐘 5000 x g。立即取出上清液并進(jìn)行測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存在≤ -20

    細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物體液 - 通過離心去除微粒并立即測(cè)定或分裝樣品并在 -20 -80 下儲(chǔ)存。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

    筆記:

    5天內(nèi)用完的樣品可在2-8保存,否則樣品必須在-201個(gè)月)或-802個(gè)月)保存,以免失去生物活性和污染。

    由于某些化學(xué)物質(zhì)的影響,使用化學(xué)裂解緩沖液制備的組織或細(xì)胞提取樣品可能會(huì)導(dǎo)致意外的 ELISA 結(jié)果。

    受細(xì)胞活力、細(xì)胞數(shù)量和采樣時(shí)間等因素的影響,試劑盒可能無法檢測(cè)到來自細(xì)胞培養(yǎng)上清液的樣本

    樣品溶血會(huì)影響結(jié)果,因此溶血標(biāo)本無法檢測(cè)。

    進(jìn)行測(cè)定時(shí),將樣品緩慢帶到室溫。

    不要使用經(jīng)過熱處理的樣品。

    程序的限制

    AOBIOUS 只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)檢測(cè)過程中消耗的樣品負(fù)責(zé)。用戶應(yīng)計(jì)算整個(gè)測(cè)試中可能使用的樣本量。請(qǐng)?zhí)崆邦A(yù)留足夠的樣品。

    試劑盒不應(yīng)超過試劑盒標(biāo)簽上的有效期。

    不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替代。

    如果樣品產(chǎn)生的值高于*高標(biāo)準(zhǔn),則用樣品稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣品并重復(fù)測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑、操作員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、孵育時(shí)間或溫度以及試劑盒使用時(shí)間的任何變化都可能導(dǎo)致結(jié)合的變化。

    試劑制備

    洗滌緩沖液 - 如果濃縮液中形成晶體,溫?zé)嶂潦覝夭⑤p輕混合直至晶體*溶解。將 30 mL 洗滌緩沖液濃縮液稀釋到去離子水或蒸餾水中,制備 750 mL 洗滌緩沖液。

    標(biāo)準(zhǔn)品 - 1.0 mL 樣品稀釋劑重新配制標(biāo)準(zhǔn)品。這種重構(gòu)產(chǎn)生 200 ng/mL 的儲(chǔ)備溶液。在進(jìn)行連續(xù)稀釋之前,讓標(biāo)準(zhǔn)靜置至少 15 分鐘并輕輕攪拌(不允許直接在孔中進(jìn)行連續(xù)稀釋)。未稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品用作高標(biāo)準(zhǔn)品 (200 ng/mL)。樣品稀釋劑用作零標(biāo)準(zhǔn) (0 ng/mL)。

    ng/mL 200 100. 50.0 25.0 12.5 6.25 3.12 0

    檢測(cè)試劑 A B - 分別使用檢測(cè)稀釋劑 A B (1:100) 稀釋至工作濃度。

    測(cè)定程序

    讓所有試劑達(dá)到室溫(請(qǐng)不要將試劑直接在37溶解)。所有試劑在移液前應(yīng)通過輕輕旋轉(zhuǎn)*混合。避免起泡。 1 次實(shí)驗(yàn)保留適當(dāng)數(shù)量的條帶,并從微量滴定板上移除多余的條帶。取出的試紙條應(yīng)重新密封并在 4 下保存至試劑盒有效期。按照前幾節(jié)的指示準(zhǔn)備所有試劑、工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品。請(qǐng)?jiān)跍y(cè)定前預(yù)測(cè)濃度。如果這些值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),用戶必須為其特定實(shí)驗(yàn)確定*佳樣品稀釋度。

    每孔加入 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)品、空白或樣品。蓋上板封口機(jī)。37孵育2小時(shí)。

    除去每孔的液體,不要洗滌。向每個(gè)孔中加入 100 μl 檢測(cè)試劑 A 工作溶液。蓋上板封口機(jī)。37孵育1小時(shí)。檢測(cè)試劑 工作溶液可能出現(xiàn)混濁。溫?zé)嶂潦覝夭⑤p輕混合直至溶液均勻。

    吸出每個(gè)孔并清洗,重復(fù)該過程 3 次,共清洗 3 次。通過使用噴瓶、多通道移液器、歧管分配器或自動(dòng)清洗器向每個(gè)孔填充清洗緩沖液(約 400 μl)進(jìn)行清洗。在每個(gè)步驟中*去除液體對(duì)于良好的性能至關(guān)重要。最后一次洗滌后,通過吸出或傾析去除任何剩余的洗滌緩沖液。將板倒置并用干凈的紙巾吸干。

    每孔加入 100 μl 檢測(cè)試劑 B 工作溶液。蓋上新的板封口機(jī)。37孵育1小時(shí)。

    重復(fù)步驟 4 中的抽吸/洗滌。

    向每個(gè)孔中加入 90 μl 底物溶液。蓋上新的板封口機(jī)。37孵育15-30分鐘。避光。

    向每個(gè)孔中加入 50 μl 終止溶液。如果顏色變化不均勻,輕輕敲擊板以確保充分混合。

    使用設(shè)置為 450 nm 的微孔板讀取器一次確定每個(gè)孔的光密度。

    筆記:

    吸光度是孵育時(shí)間的函數(shù)。因此,在開始檢測(cè)之前,建議在使用前新鮮制備所有試劑,并將所有需要的條孔固定在微量滴定框架中。這將確保每個(gè)移液步驟的經(jīng)過時(shí)間相等,不會(huì)中斷。

    請(qǐng)按照說明小心重新配制標(biāo)準(zhǔn)品或工作檢測(cè)試劑 A B,避免起泡并輕輕混合直至晶體*溶解。重新配制的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)試劑 A B 只能使用一次。該測(cè)定需要小體積移液。為盡量減少移液引起的不精確,請(qǐng)確保已校準(zhǔn)移液器。一次移液時(shí),建議吸取 10μl 以上。

    為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果,在孵育步驟中必須正確粘附封板劑。不要讓孔在孵育步驟之間長(zhǎng)時(shí)間未覆蓋。一旦將試劑添加到孔條中,在檢測(cè)過程中的任何時(shí)候都不要讓條干燥。

    對(duì)于程序中的每個(gè)步驟,將試劑添加到檢測(cè)板的總分配時(shí)間不應(yīng)超過 10 分鐘。

    為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谔砑用總€(gè)標(biāo)準(zhǔn)液、添加樣品和添加試劑之間更換移液器吸頭。此外,為每種試劑使用單獨(dú)的容器。

    洗滌程序至關(guān)重要。洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致精度差和吸光度讀數(shù)錯(cuò)誤升高。

    建議復(fù)制所有標(biāo)準(zhǔn)和樣品,盡管不是必需的。

    底物溶液很容易被污染。請(qǐng)避光。

    特異性

    該檢測(cè)可識(shí)別重組和天然人 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)或干擾。

    注:受限于現(xiàn)有技術(shù)和知識(shí),我們不可能完成人類與所有類似物之間的交叉反應(yīng)檢測(cè),因此交叉反應(yīng)可能仍然存在。

    檢測(cè) 范圍

    3.12-200 納克/毫升。

    結(jié)果計(jì)算

    平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)、對(duì)照和樣品的重復(fù)讀數(shù),并減去平均零標(biāo)準(zhǔn)光密度。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯 (4-PL) 曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件減少數(shù)據(jù)來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。作為替代方案,通過在 x 軸上繪制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度與 y 軸上的濃度來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,并通過圖表上的點(diǎn)繪制最佳擬合曲線??梢酝ㄟ^繪制 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 濃度的對(duì)數(shù)對(duì) OD 的對(duì)數(shù)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性化,并且可以通過回歸分析確定最佳擬合線。建議使用一些相關(guān)的軟件來做這個(gè)計(jì)算,比如曲線專家1.3。此過程將產(chǎn)生適當(dāng)?shù)惶_的數(shù)據(jù)擬合。如果樣品已被稀釋,則從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取的濃度必須乘以稀釋因子。

    重要提示:

    受限于現(xiàn)狀和科學(xué)技術(shù),我們無法對(duì)供應(yīng)商提供的原材料進(jìn)行全面的鑒定和分析。因此使用該套件可能存在一些定性和技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)

    最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果將與產(chǎn)品的有效性、終端用戶的操作技能和實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。請(qǐng)確保有足夠的樣品可用。

    不同批次的試劑盒在檢測(cè)范圍、靈敏度、顯色時(shí)間等方面可能略有差異。請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn),本站電子版僅供參考。

    第一次開板時(shí),孔內(nèi)可能會(huì)有一些霧狀物質(zhì)。它不會(huì)對(duì)最終的化驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生任何影響。

    除非需要,否則不要從儲(chǔ)存袋中取出微量滴定板。

    具有 10nm 或更小帶寬和 450nm 波長(zhǎng)處 0-3 OD 或更大光密度范圍的微量滴定板讀數(shù)器可用于吸光度測(cè)量。

    每次轉(zhuǎn)移時(shí)使用新的一次性移液器吸頭以避免污染。

    不要將試劑從一個(gè)試劑盒批次替換到另一個(gè)試劑盒批次。僅使用制造商提供的試劑。

    即使是同一個(gè)操作員,在兩個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)中也可能得到不同的結(jié)果。為了獲得更好的重現(xiàn)性結(jié)果,應(yīng)控制測(cè)定中每個(gè)步驟的操作。此外,建議在每批檢測(cè)前進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)。

    每個(gè)試劑盒都經(jīng)過嚴(yán)格的 QC 測(cè)試。但是,由于一些意外的運(yùn)輸條件或不同的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,最終用戶的結(jié)果可能與我們的內(nèi)部數(shù)據(jù)不一致。來自不同批次的試劑盒之間的測(cè)定內(nèi)差異也可能來自上述因素。

    來自不同制造商的相同產(chǎn)品的套件可能會(huì)產(chǎn)生不同的結(jié)果,因?yàn)槲覀儧]有將我們的產(chǎn)品與其他制造商進(jìn)行比較。

    有效期:六個(gè)月。

    預(yù)防

    建議用于該試劑盒的終止溶液是酸性溶液。使用此材料時(shí),請(qǐng)佩戴眼部、手部、面部和衣物保護(hù)裝置。

    典型數(shù)據(jù)

    此圖表數(shù)據(jù)作為示例顯示。每次運(yùn)行測(cè)定時(shí)都必須生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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